الخطوات الثلاث من ير

تفاعل البوليميراز المتسلسل، أو ير، هو طريقة لجعل كميات كبيرة من تسلسل معين من الحمض النووي باستخدام كمية صغيرة فقط من المادة الأصلية. هذه التقنية، التي صقل منها كاري موليس جائزة نوبل في الكيمياء عام 1993، يتضمن ثلاث خطوات متميزة.

ير هو عملية التضخيم. من أجل توليد العديد من ميكروجرام من حمض نووي معين، يجب، بالطبع، لديها الحمض النووي من الفائدة، ودعا قالب. يمكن أن تأتي من أي مصدر – الحيوانات والنباتات والفيروسات أو البكتيريا. (يمكن تحليل الحمض النووي الريبي باستخدام ير، ولكن عليك أن تستخدم لأول مرة الانزيم الفيروسي ترانسكريبتاس العكسي لتوليد نسخة الحمض النووي من الحمض النووي الريبي، ثم، يمكنك استخدام تلك النسخة دنا كما القالب.) ل ير، شكل المقاومة للبوليميراز انزيم الحمض النووي، عموما بوليميراز طق، مما يجعل خيوط جديدة من الحمض النووي. تحتاج أيضا الاشعال؛ أقسام قصيرة من الحمض النووي التي ترتبط بقع محددة على القالب وتلمس تكرار هذا الجزء من القالب. وأخيرا، تحتاج دنتبس، النيوكليوتيدات المستخدمة لبناء فروع جديدة، ومحلول ملحي معين، ودعا المخزن المؤقت، التي لتنفيذ ير. هذا يساعد على استقرار الكواشف ومنتجات التفاعل.

الخطوة الأولى في ير هو تغيير طبيعة قالب الحمض النووي، وهو ما يعني فك الضغط على اثنين من فروع التي، معا، تشكل هيكل الحلزون المزدوج من الحمض النووي. في حالة ير، يتم تسخين القالب لفترة وجيزة إلى ما بين 92 درجة إلى 95 درجة مئوية، ساخنة بما فيه الكفاية لكسر الروابط الهيدروجينية التي تبقي الحمض النووي في شكله المزدوج الحلزون مميزة وفصله إلى اثنين من فروع واحدة.

بعد اكتمال التشويه، يتم تبريد الخليط إلى درجة حرارة منخفضة تصل إلى 45 درجة مئوية. وهذا يسمح روابط الهيدروجين لتشكيل بين أزواج قاعدة النيوكليوتيدات التكميلية من قالب الحمض النووي والاشعال الحمض النووي، مع الأدينين الترابط إلى الثيمين والسيتوزين إلى غوانين. يتم تحديد درجة الحرارة الصلب على أساس ما هو معروف عن الحمض النووي القالب وتسلسل التمهيدي. على سبيل المثال، إذا تضخيم الجينة من البعوض، إذا كان لديك الاشعال من أنواع البعوض في نفس الجنس، يمكن أن يكون لديك درجة حرارة الصلب أعلى؛ وإذا كان التسلسل الوحيد المتاح هو من ذبابة الفاكهة، فإن درجة حرارة الصلب يجب أن يكون أقل لأن تسلسل سوف تتطابق أقل تماما. يحدث الصلب بسرعة وكفاءة لأن هناك أكثر بكثير من الحمض النووي التمهيدي من قالب الحمض النووي في الخليط، وخاصة في البداية.

مرة واحدة الصلب قد حدث، شكل الحرارة مستقرة من البلمرة الحمض النووي خطوات في البدء السريع، متتابعة إضافة النيوكليوتيدات إلى خيوط التمهيدي – 50-100 النيوكليوتيدات في الثانية الواحدة. لركلة هذا في العتاد، يتم تسخين الخليط مرة أخرى، وهذه المرة إلى أكثر تواضعا 72 درجة مئوية.

Refluso Acido